2026 年 10 月 20 日，GSK 的反义寡核苷酸（ASO）药物贝普若韦生（Hibsago）获 FDA 批准，联合核苷（酸）类似物用于无肝硬化的慢性乙肝成人患者。B-Well III 期数据显示，6 个月疗程后总体人群功能性治愈率 19%（233/1220，安慰剂 0/614），基线表面抗原 ≤1000 IU/ml 亚组达 26%。这是首个在获批层面兑现"乙肝功能性治愈"的核酸药物。对做化学的人来说，它也是一个把寡核苷酸修饰讲清楚的现成样本。

一、为什么寡核苷酸必须修饰

天然的磷酸二酯 DNA/RNA 进不了细胞，进了细胞也活不过几分钟——血浆核酸酶、肾脏清除、细胞摄取三重障碍叠在一起。所有获批的寡核苷酸药物，本质上都是在解决这三个问题，而手段集中在四个化学位置。

二、四个修饰位置

贝普若韦生属于未偶联的 2'-MOE gapmer：两端各若干 2'-MOE 修饰碱基保护，中间一段 DNA 缺口用于招募 RNase H 切割靶 RNA，骨架为全硫代。它没有 GalNAc，靠化学修饰本身实现肝摄取，每周皮下给药。这个设计选择很关键——GalNAc 能大幅提高肝靶向效率，但也会把分子锁在肝细胞内；ASO 需要在肝内保持足够长的暴露时间，裸 ASO 的分布特征反而更匹配。

三、gapmer 的化学难点在"缺口"

gapmer 的设计逻辑是"两端修饰、中间留空"。化学合成上的难度恰恰在这个缺口：

1. 修饰碱基与 DNA 碱基的偶联效率不同：2'-MOE 单体空间位阻大，偶联时间与活化剂用量要单独优化，否则出现大量 N-1 缺失序列；

1. 硫代步骤的均匀性：20 个左右磷酸骨架逐个硫代，任何一个位点硫化不完全都会留下 P=O 杂质，而 P=O 杂质与目标物的极性接近，色谱分离困难；

1. 手性累积：每个 PS 位点产生一个手性中心，19 个位点意味着 2^19 种立体异构体。目前工艺上不做手性控制，但批间的手性分布必须稳定，否则生物活性与代谢稳定性都会漂移；

1. 脱保护与切割：甲胺/氨水处理条件不当会引起脱嘌呤与脱氨（胞苷→尿苷），这两类杂质是寡核苷酸质控的常客。

四、质控方法怎么配

• 纯度与杂质：阴离子交换色谱（SAX/IEX）看硫代不完全与缺失序列，IP-RP-HPLC 看疏水性杂质；

• 分子量确证：LC-MS（ESI 负离子），需要足够的去盐与脱气；

• 序列确认：串联质谱或酶解后指纹图谱；

• 手性分布：目前多用 31P NMR 评估整体硫化程度，单条序列的手性拆分仍不常规。

五、对上游化学的三点提示

1. 修饰单体的质量决定一切：2'-MOE、2'-F 亚磷酰胺单体的纯度、水分与储存条件，直接影响偶联效率与杂质谱；

1. GalNAc 配体的成本占比高：三触角 GalNAc 的合成步骤多、纯化难，是偶联型寡核苷酸成本的主要变量之一；

1. 对照品与杂质对照品需求上升：随着国内多个小核酸进入 III 期，N-1 序列、P=O 杂质、脱氨杂质对照品的定制需求明显增加，这类品种通常只要几十毫克，但结构确证要求完整。

六、别把 ASO 和 siRNA 混为一谈

两者常被合称"小核酸"，但化学策略不同：siRNA 是双链、依赖 RISC，通常需要 GalNAc 实现肝靶向；ASO 是单链、依赖 RNase H（gapmer）或剪接调控，化学修饰的权重更高。看到"小核酸"三个字就按 siRNA 的路线去备料，很容易在修饰单体和纯化方法上走偏。

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