产品概述

5-氨基荧光素标记鹅去氧胆酸（5-Aminofluorescein-Chenodeoxycholic Acid, 5-AF-CDCA） 是将初级胆汁酸鹅去氧胆酸与5-氨基荧光素偶联的高灵敏度荧光探针。鹅去氧胆酸（Chenodeoxycholic Acid, CDCA）是人体内含量最丰富的初级胆汁酸之一，是法尼醇X受体（FXR）的最强天然激动剂（EC50 ≈ 10 μM），同时也可激活TGR5和PXR等核受体。CDCA在胆汁酸稳态、脂质代谢、糖代谢和肠道炎症调控中发挥核心作用。5-氨基荧光素标记版本通过引入高量子产率的荧光素标签，实现了对CDCA细胞摄取动力学、受体激活可视化和胆汁酸转运蛋白功能的实时监测。

标记策略与技术特点

5-氨基荧光素的优势

5-氨基荧光素（5-Aminofluorescein, 5-AF）是荧光素的氨基衍生物，与普通FITC相比具有以下优势：

• 反应活性：氨基可通过酰胺键直接与CDCA的C24羧基偶联，反应条件温和

• 荧光性能：Ex/Em 492/518 nm，量子产率~0.93，是绿色荧光团中亮度最高的之一

• pH敏感性：荧光素在pH 6-8范围内荧光稳定，适合生理条件下的成像

• 水溶性：比疏水性荧光素酯类更易溶于水相缓冲液

标记位点设计

• 偶联位点：CDCA的C24位羧基与5-AF的氨基形成酰胺键

• 活性保留：C24位远离CDCA甾体骨架的FXR结合面（3α,7α-二羟基和疏水侧面），标记对FXR激活影响有限

• 连接方式：直接酰胺键连接（无额外连接臂），保持分子紧凑性

荧光特性

核心应用场景

应用一：胆汁酸细胞摄取动力学

胆汁酸跨膜转运由ASBT（顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白）、NTCP、OATP等转运蛋白介导。5-AF-CDCA探针可用于：

1. 实时摄取监测：荧光素的高亮度允许使用低浓度探针（0.1-1 μM）进行实时摄取追踪

2. 转运蛋白特异性：在表达不同转运蛋白的细胞系中比较摄取速率

3. 抑制剂筛选：评估转运蛋白抑制剂对CDCA摄取的影响，为药物相互作用研究提供数据

应用二：FXR受体激活可视化

CDCA是FXR的最强天然激动剂。荧光探针可用于研究CDCA-FXR互作：

• 核定位追踪：CDCA进入细胞后与FXR结合并入核激活转录，荧光信号从胞质到胞核的转位可实时观察

• 浓度-效应关系：不同浓度探针处理，荧光强度与FXR靶基因（SHP、OSTα/β）表达水平关联分析

• 受体选择性比较：比较CDCA探针与石胆酸探针（产品04）的受体结合差异

应用三：胆汁酸肝肠循环研究

• 肝细胞摄取建模：在原代肝细胞中评估CDCA的摄取和胆管排泄

• 肠道吸收评估：在肠上皮细胞模型（Caco-2）中监测CDCA的顶端摄取和基底外排

• 菌群代谢模拟：观察CDCA在含肠道菌群的培养体系中的代谢转化

产品优势

技术参数

使用建议

1. 储存液：DMSO配制1-10 mM储存液，严格避光（荧光素对光敏感）

2. 摄取实验：0.1-1 μM，37°C实时监测或定时点检测

3. 成像浓度：1-5 μM（共聚焦显微镜）

4. 荧光通道：488 nm激发，FITC通道（500-540 nm）检测

5. pH注意：确保实验缓冲液pH在7.0-8.0之间，酸性环境荧光素荧光减弱

6. 光漂白：荧光素易光漂白，成像时尽量降低激光功率、缩短曝光时间

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