产品概述

生物素标记5-羟基吲哚（Biotin-5-Hydroxyindole） 是将5-羟基吲哚与生物素标签偶联的亲和探针，是荧光标记版本（见产品06）的互补产品。5-羟基吲哚作为血清素（5-HT）的结构类似物，可与血清素受体家族（5-HT1-7）、血清素转运蛋白（SERT/SLC6A4）及色氨酸羟化酶等通路蛋白相互作用。荧光标记版本适合实时成像和动力学追踪，而生物素标记版本则专注于靶蛋白的亲和富集、鉴定和定量蛋白质组学分析。两者搭配使用，可从"可视化"和"可富集"两个维度全面解析血清素代谢通路的分子网络。

标记策略与技术特点

与荧光版本的互补设计

标记位点与连接臂

• 标记位点：与荧光版本保持一致，在3位碳上标记，保留5位羟基活性基团

• 连接臂：采用PEG4连接臂（约20 Å），提供足够的柔性使生物素标签远离吲哚核心，不干扰与靶蛋白的结合

• 标记比：严格控制为1:1单标记，避免多标记导致的非特异性结合增加

核心应用场景

应用一：血清素受体互作组学

5-羟色胺受体家族包含7大类14个亚型，5-羟基吲哚作为血清素类似物可与多个亚型相互作用。生物素探针可用于：

1. 受体富集验证：pull-down后Western Blot检测5-HTR亚型（如5-HT1A、5-HT2A、5-HT3等）

2. 新互作蛋白发现：定量蛋白质组学鉴定与5-羟基吲哚特异性结合的新蛋白

3. 亚型选择性分析：通过竞争实验（用不同受体亚型选择性配体竞争）评估探针对各亚型的结合选择性

应用二：SERT转运蛋白研究

血清素转运蛋白SERT是SSRI抗抑郁药物的作用靶点：

• SERT富集验证：从脑组织或表达SERT的细胞系中pull-down SERT

• 底物结合位点定位：通过有限蛋白酶切+质谱定位5-羟基吲哚在SERT上的结合区域

• 药物竞争分析：用氟西汀、舍曲林等SSRI药物竞争，验证结合的特异性

应用三：色氨酸代谢通路解析

5-羟基吲哚处于色氨酸-血清素代谢通路的中间位置，连接上游的色氨酸羟化酶（TPH）和下游的MAO/ALDH代谢：

• 通路酶富集：pull-down鉴定TPH、芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）等通路酶

• 代谢节点蛋白发现：鉴定调控5-羟基吲哚代谢走向的未知蛋白

• 组织差异比较：比较脑组织、肠道组织和血小板中5-羟基吲哚结合蛋白的差异谱

产品优势

技术参数

使用建议

1. 储存液：DMSO配制10 mM储存液，分装保存

2. Pull-down浓度：5-20 μM，4°C孵育1-2小时

3. 对照设置：游离5-羟基吲哚（10倍过量）竞争对照 + 空白磁珠对照

4. 洗涤优化：建议含0.1% Triton X-100的PBS洗涤3-5次

5. 搭配建议：与荧光标记版本（产品06）配合使用，实现成像+富集双重验证

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