产品概述

生物素标记石胆酸（Biotin-Lithocholic Acid, Biotin-LCA） 是在次级胆汁酸石胆酸分子上精准引入生物素标签的功能性探针。石胆酸（Lithocholic Acid, LCA）是由肠道细菌（如梭菌属）将鹅去氧胆酸7α-脱羟基后产生的次级胆汁酸，是法尼醇X受体（FXR）、TGR5（GPBAR1）和维生素D受体（VDR）的天然配体。近年研究发现，石胆酸在糖代谢调控、肠道屏障维护、神经保护和抗肿瘤等过程中具有重要作用，但其作用的分子靶点和信号网络远未完全阐明。生物素标记石胆酸为胆汁酸受体互作组学、靶蛋白鉴定和信号通路解析提供了直接可用的化学工具。

标记策略与技术特点

标记位点选择

石胆酸是C24胆汁酸，含有一个羧基（C24位）和三个羟基/甲基结构。受体结合主要通过甾体骨架的疏水作用和羟基的氢键网络实现。标记策略如下：

• 标记位点：在C24位羧基上通过酰胺键连接生物素。该位点远离甾体骨架的受体结合面，对FXR/TGR5结合影响最小

• 连接臂：采用C6或PEG4连接臂，将生物素标签延伸至受体结合口袋之外

• 构型保留：标记不改变石胆酸甾体骨架的立体构型，确保与受体的立体选择性识别

活性考量

石胆酸对不同受体的亲和力有差异（FXR EC50 ≈ 30-100 μM，TGR5 EC50 ≈ 1-5 μM）。标记后的探针需保证：

• 对TGR5的激活能力偏移<5倍（TGR5亲和力较高，容错空间大）

• 对FXR的结合能力通过竞争实验验证

• 保持石胆酸的细胞膜透过能力

核心应用场景

应用一：胆汁酸受体靶蛋白鉴定

石胆酸除了已知的FXR/TGR5/VDR外，是否还存在其他结合蛋白？本探针可用于：

1. 受体富集验证：pull-down后Western Blot检测FXR、TGR5、VDR等已知受体

2. 新靶点发现：定量蛋白质组学鉴定石胆酸的潜在新结合蛋白

3. 组织特异性分析：比较肝脏、肠道和脑组织中石胆酸结合蛋白的差异谱

应用二：TGR5信号通路研究

TGR5是石胆酸的高亲和力受体，在能量代谢、炎症调控和GLP-1分泌中发挥关键作用：

• 受体engagement验证：CETSA结合pull-down，在活细胞水平验证石胆酸-TGR5结合

• 下游信号分析：pull-down富集TGR5复合物，鉴定信号转导组分

• 肠脑轴研究：利用探针追踪石胆酸在不同组织中的受体结合动态

应用三：抗肿瘤机制探索

近年研究发现石胆酸对多种肿瘤细胞具有选择性杀伤作用，机制涉及线粒体膜电位破坏和内质网应激。生物素探针可用于：

• 肿瘤细胞靶点鉴定：比较正常细胞和肿瘤细胞中石胆酸结合蛋白的差异

• 线粒体靶标富集：从线粒体组分中pull-down鉴定石胆酸的线粒体靶标

• 剂量-效应关联：不同浓度探针处理，关联靶点结合与细胞毒性

产品优势

技术参数

使用建议

1. 储存液：DMSO或无水乙醇配制10-50 mM储存液

2. 工作浓度：Pull-down 10-50 μM；细胞活性实验50-200 μM

3. 溶解注意：石胆酸疏水性较强，建议先溶于DMSO再用水稀释

4. 对照：设置鹅去氧胆酸-biotin作为结构类似物对照，评估特异性

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