产品概述

生物素PEG修饰衣康酸（Biotin-PEG-Itaconic Acid） 是将免疫代谢明星分子衣康酸与生物素标签通过PEG连接臂偶联的功能性探针。衣康酸（Itaconic Acid, ITA）是近年来免疫代谢领域最受关注的小分子代谢物之一，由巨噬细胞中IRG1（ACOD1）酶催化顺乌头酸脱羧生成。衣康酸通过抑制琥珀酸脱氢酶（SDH）、激活Nrf2抗氧化通路、修饰Keap1和TET蛋白的半胱氨酸残基等多重机制发挥抗炎和免疫调控功能。然而，衣康酸分子量仅130 Da，缺乏可直接用于亲和富集和检测的标签，极大地限制了其作用机制的深入研究。本产品通过引入PEG连接臂和生物素标签，为衣康酸的靶蛋白鉴定、亚细胞分布追踪和代谢通路解析提供了突破性工具。

标记策略与技术特点

标记挑战与解决方案

衣康酸是一个不饱和二羧酸（C₅H₆O₄），分子小、极性大，标记策略面临独特挑战：

• 标记位点：在衣康酸的一个羧基上通过酰胺键连接PEG-生物素，保留另一个羧基和双键，确保其与靶蛋白（如SDH、TET）的结合能力不被完全破坏

• PEG连接臂的必要性：衣康酸本身分子极小，直接连接生物素会严重改变其理化性质。采用PEG4-PEG12连接臂，将生物素标签"延伸"到衣康酸结合口袋之外，既不影响代谢物-蛋白互作，又便于链霉亲和素磁珠富集

• 亲水性维持：PEG链的亲水性保证了探针在水相缓冲液中的良好溶解性，更贴近衣康酸的生理溶解状态

衣康酸的迈克尔加成反应性

衣康酸含有一个α,β-不饱和羧酸结构，可通过迈克尔加成反应修饰蛋白质半胱氨酸残基。生物素PEG修饰版本保留了这一反应性（标记在另一羧基上），因此可用于：

• 捕获被衣康酸共价修饰的靶蛋白

• 鉴定衣康酸修饰的半胱氨酸位点

• 同时通过生物素标签实现富集，实现"标记+富集"双重功能

核心应用场景

应用一：衣康酸靶蛋白组学鉴定

巨噬细胞激活后产生大量衣康酸，其下游靶蛋白尚未完全阐明。本探针可用于：

1. 细胞裂解液水平的靶蛋白富集：将探针与巨噬细胞裂解液孵育，经链霉亲和素磁珠富集后进行定量蛋白质组学分析

2. 活细胞原位标记：将探针加入培养巨噬细胞，利用衣康酸的迈克尔加成反应性原位捕获靶蛋白，裂解后富集鉴定

3. 竞争验证：用游离衣康酸竞争，排除非特异性结合

应用二：SDH抑制机制研究

衣康酸通过结合SDH（琥珀酸脱氢酶，复合体II）抑制其活性，但具体结合位点和机制仍有争议。生物素PEG探针可用于：

• SDH富集验证：pull-down后检测SDHA/SDHB亚基

• 结合位点定位：通过有限蛋白酶切+质谱，定位衣康酸在SDH上的结合区域

• 构效关系研究：比较不同PEG长度探针的SDH富集效率，优化探针设计

应用三：Nrf2通路与抗氧化研究

衣康酸通过修饰Keap1半胱氨酸激活Nrf2抗氧化通路。本探针可用于：

• Keap1富集：pull-down验证衣康酸-Keap1的直接互作

• 修饰位点鉴定：富集后通过质谱鉴定被衣康酸修饰的Keap1半胱氨酸位点

• 剂量-效应关系：不同浓度探针处理，定量评估Keap1修饰程度与Nrf2激活水平的相关性

产品优势

技术参数

使用建议

1. 储存液：DMSO或水配制10-50 mM储存液，分装-20°C保存

2. 工作浓度：裂解液标记10-100 μM；活细胞标记100-500 μM

3. 反应条件：迈克尔加成反应推荐pH 7.0-7.5，37°C反应1-2小时

4. 对照：设置无探针组和游离衣康酸竞争组

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