产品概述

生物素修饰舒尼替尼（Biotin-Sunitinib） 是在舒尼替尼分子结构基础上引入生物素标签的衍生物。舒尼替尼（Sunitinib, Sutent®）是全球首个获批的多靶点受体酪氨酸激酶（RTK）抑制剂，可同时靶向VEGFR1-3、PDGFRα/β、c-KIT、FLT3、RET和CSF1R等多个激酶，临床用于治疗晚期肾细胞癌、胃肠道间质瘤（GIST）和胰腺神经内分泌肿瘤。通过在舒尼替尼分子上精准引入生物素标签，这一探针分子保留了母药的多激酶结合能力，同时赋予其通过链霉亲和素体系进行富集、检测和追踪的功能，成为激酶靶点验证和化学蛋白质组学研究的得力工具。

标记策略与技术特点

标记位点设计

舒尼替尼分子的吲哚酮核心是与激酶ATP结合口袋结合的关键药效团，标记位点的选择必须避开该区域以保持结合活性。纳孚生物采用以下策略：

• 连接位点：在舒尼替尼分子的二乙氨基侧链末端进行修饰，该位点远离激酶结合口袋，对结合亲和力影响最小

• 连接臂选择：采用PEG4或C6连接臂，提供适当的柔性和亲水性，减少空间位阻，同时避免疏水性增加导致的非特异性结合

• 标记比控制：确保每个舒尼替尼分子连接一个生物素标签，标记比≈1:1，保证批次间一致性

结构确证

每批次产品均经过LC-MS和¹H-NMR确证，确保标记位点和产物结构正确。纯度≥95%（HPLC），游离生物素残留<1%。

核心应用场景

应用一：激酶靶点亲和富集与鉴定

生物素修饰舒尼替尼保留了与VEGFR、PDGFR、c-KIT等靶激酶的结合能力，可用于：

1. 靶点Pull-down：将探针与细胞裂解液孵育，通过链霉亲和素磁珠富集与舒尼替尼直接结合的激酶，经LC-MS/MS鉴定

2. 竞争性结合实验：用过量未标记舒尼替尼竞争，排除非特异性结合蛋白，提高靶点鉴定可信度

3. 脱靶效应研究：系统鉴定舒尼替尼的全激酶组作用谱，评估潜在脱靶风险

应用二：药物-靶点engagement验证

通过CETSA（细胞热位移分析）结合生物素探针pull-down，在活细胞水平验证舒尼替尼与靶激酶的直接结合：

• 评估不同浓度下的靶点engagement程度

• 比较野生型和突变型激酶的结合差异

• 研究耐药机制（如c-KIT二级突变对结合的影响）

应用三：药物亚细胞分布追踪

利用生物素-链霉亲和素的高亲和力（Kd≈10⁻¹⁵ M），结合荧光标记链霉亲和素，可在细胞水平追踪舒尼替尼的摄取和亚细胞分布：

• 共聚焦显微镜观察药物在细胞内的定位

• 流式细胞术定量分析药物摄取动力学

• 与溶酶体/线粒体等细胞器标志物共定位分析

产品优势

技术参数

使用建议

1. 储存液配制：用无水DMSO配制10 mM储存液，分装后-20°C避光保存

2. 工作浓度：Pull-down实验建议1-10 μM；CETSA建议0.1-1 μM

3. 对照设置：建议同时使用未标记舒尼替尼进行竞争实验，排除非特异性结合

4. 注意事项：避免反复冻融；DMSO储存液建议3个月内使用

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