RNA上存在超过170 种化学修饰，其中N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，简称为m⁶A）是真核RNA中最常见的一种。在哺乳细胞中， METTL3，METTL14，WTAP等催化形成m⁶A，FTO和ALKBH5负责擦除m⁶A，YTH和HNRNP蛋白家族则识别m⁶A以发挥其功能。据报道，m⁶A参与调控RNA性质，从而影响细胞内生物活动，并且与众多疾病息息相关。然而由于m⁶A的作用依赖于其生物环境，即同一条RNA上不同位置的m⁶A，不同RNA/细胞/组织中的m⁶A发挥的作用可能截然不同，因此开发可精准编辑m⁶A的工具对解析特定m⁶A的功能至关重要。

为此，可特异性结合RNA的CRISPR Cas13系统被用来构建新型的m⁶A编辑器，但大部分基于Cas13的编辑器一经表达后就会开始m⁶A编辑，这一过程缺乏可控性，存在潜在脱靶的安全隐患。并且体积较大的Cas13蛋白与RNA结合可能会产生空间位阻效应而对RNA自身产生干扰。因此，实现对基于Cas13的 m⁶A编辑器的剂量浓度和时间控制，有望能解决这些潜在问题。

近日，美国凯斯西储大学Fu-Sen Liang教授团队提出了一种新的策略，利用依赖Shield-1小分子的FKBP (F36V, L106P)突变体（简称FKBP*），与他们之前开发的dCas13b-ALK（66-286 aa of ALKBH5）进行联合，构建了一种稳定性可控的CRISPR-Cas13b编辑器（称为FKBP*-dCas13b-ALK），用于精准的m⁶A RNA甲基化擦除。

首先，作者通过蛋白质印记法证实了FKBP*-dCas13b-ALK在细胞内的表达量可以通过控制Shield-1浓度和处理时间来调节。进一步的研究发现，仅用Shield-1处理细胞后，FKBP*-dCas13b-ALK才能特异性地被招募到目标RNA，如Malat1 lncRNA上的 m⁶A 靶点附近，并精准降低该靶点上的m⁶A水平，而不影响远端的非靶点腺嘌呤和其他RNA上可被编辑腺嘌呤m⁶A水平。此外，作者还发现对该靶点的m⁶A进行擦除会降低与RNA结合的HNRNPC蛋白含量，但不影响其稳定性。实验结果也表明，该体系对特定RNA上的m⁶A 靶点编辑受到Shield-1处理时间的调控。

此外，作者发现在去除Shield-1后，原本特异性招募的FKBP*-dCas13b-ALK，m⁶A擦除及其生物效应都可被逆转。通过时间进程研究，作者发现招募到目标RNA上的FKBP*-dCas13b-ALK会随着Shield-1去除而迅速减少，在3 h后恢复到背景水平，并且证实这是由FKBP*-dCas13b-ALK在细胞内的快速降解引起的。尽管该靶点上被降低的m6A水平能在Shield-1去除24 h后完全上调到到背景水平，但其恢复速度远比融合蛋白从RNA上脱离要慢。这一时间差提供了一个研究m⁶A而不受融合蛋白干扰的窗口。该体系用于编辑其他RNA 上m⁶A的普适性也得到验证。

在该工作中，作者开发了一种依赖于Shield-1的FKBP*-dCas13b-ALK体系，能广泛用于实现特定RNA上精准可逆的m6A擦除。编辑完m⁶A后，去除Shield-1会导致融合蛋白迅速降解，从而降低其对RNA的干扰，也为在原生环境下研究m⁶A提供了合适的时间窗口。这一发现为深入研究m⁶A的功能提供了新的方法。