网站首页/有机动态/有机试剂/ACS Cent. Sci. | 利用正电子断层扫描实现体内测定颗粒酶的酶解活性
ACS Cent. Sci. | 利用正电子断层扫描实现体内测定颗粒酶的酶解活性
推荐发表在ACS Central Science上的文章,题目是“In Vivo Measurement of Granzyme Proteolysis from Activated Immune Cells with PET”,通讯作者是美国UCSF的Charles S. Craik教授和Michael J. Evans教授。



免疫细胞会分泌颗粒酶来使问题细胞促凋亡,在免疫细胞和靶细胞对接后,瞬时地释放颗粒酶在两者之间的小空间内,然后再进入靶细胞细胞质,执行凋亡相关功能。目前的研究中,有些颗粒酶功能尚不清楚,而且失调的颗粒酶分泌和酶解会导致疾病。此外,目前对颗粒酶的体外研究相对较为简单,活体研究对象老鼠体系又和人类体系大有不同。因此,发展对于人类细胞的体内研究方法是十分重要的。正电子断层扫描(PET)是可以在深层组织中都能高分辨成像的技术,因此作者计划运用该方法,再设计一个放射性同位素可供颗粒酶切割的限制性肽段,用于研究颗粒酶的活性。


首先,对于该限制性相互作用肽段GRIP B的设计有三点,一是N端的非毒性抗菌肽(AMP)偶联放射性同位素,二是中间特异性地被颗粒酶GZMB切开的位点,三是C端用来阻碍AMP形成螺旋结合到磷脂层的掩盖区域,而在酶解后,N端部分可以和靶细胞结合再测定,组织中的放射性分布就能反应颗粒酶的活性。在对于中间段特异性切割位点的选择上,他们在200多个8氨基酸的序列库里进行筛选,并通过质谱测定肽段序列。结果显示,XXPDXXXX序列最优,于是他们选择了IEPDVSQV进行之后的实验。然后,作者在选好的肽段上合成5FAM标签,并通过流式进行测定。结果显示,GRIP B和靶细胞结合很弱,但是当用颗粒酶提前孵育后,肽段结合靶细胞的能力增强,而且均没有细胞毒性。接下来,为了连上螯合剂进行放射性标记,他们在N端的苯基丙氨酸上连接了DOTA-NHS酯,再用64Cu进行放射性标记。因为其半衰期较长,所以允许找到成像的最佳时间点,优化条件。之后,作者也通过和不能切割的负对照GRIP B对比,证明了他们设计的放射性GRIP B对颗粒酶的特异性。免疫调节疗法也能影响该方法呈现出的放射性生物分布,能够检测到in vivo T细胞的激活。
 


本文作者:LBW
责任编辑:KLH
原文链接:https://doi.org/10.1021/acscentsci.1c00529
原文引用:10.1021/acscentsci.1c00529


纳孚服务
  • 化学试剂
  • 提供稀有化学试剂现货

  • 化学试剂定制合成服务
  • 上海纳孚生物科技有限公司提供市场稀缺的化学试剂定制服务

  • 新材料现货
  • 上海纳孚生物科技有限公司代理或自产包含石墨烯产品,类石墨烯产品、碳纳米管、无机纳米材料以及一些高分子聚合物材料

  • 结构设计及定制合成
  • 可以根据客户需求对所需化合物结构进行设计改性,从而定制合成出客户所需分子式结构

  • 联系我们
  • 021-58952328
  • 13125124762
  • info@chemhui.com
  • 关注我们
在线客服
live chat